甲基化酶市場需求如何 未來甲基化酶行業(yè)市場還有前景嗎

• 劉明月 2023年7月7日 來源：百度百科 中研網(wǎng) 750 45
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構建 DNA 文庫時，用 AluⅠ(AG↓CT) 和 HaeⅢ(GG↓CC) 部分消化基因組 DNA 后，將得到的片段用 M.EcoRⅠ 甲基化酶處理，然后加上合成的 EcoRⅠ 接頭，再用 EcoRⅠ 來切割時只有接頭上的位點可被切割，從而保護基因組片段。

構建 DNA 文庫時，用 AluⅠ(AG↓CT) 和 HaeⅢ(GG↓CC) 部分消化基因組 DNA 后，將得到的片段用 M.EcoRⅠ 甲基化酶處理，然后加上合成的 EcoRⅠ 接頭，再用 EcoRⅠ 來切割時只有接頭上的位點可被切割，從而保護基因組片段。

E.coli 中至少有 3 種依賴于甲基化的限制系統(tǒng) mcrA、 mcrBC 和 mrr ，它們識別的序列各不相同，但只識別經(jīng)過甲基化的序列，都限制由 CpG 甲基化酶(M SssⅠ)作用的 DNA (限制即消化降解)。 Mrr 限制 m6A ; McrA 限制 HpaⅡ 甲基化修飾的位點; McrBC 切割兩套半位點(G/A)mC ，這兩套位點之間間隔 2kb ，最適為 55～103bp ，需 GTP ;大多數(shù)常用的 E.coli 都含這三個限制系統(tǒng)中的一個或幾個，三個都不限制 Dcm 修飾的位點，Mrr不限制 dam、 EcoKⅠ、 EcoRⅠ 修飾的位點。

國內(nèi)甲基化酶行業(yè)前景如何?據(jù)中研研究院出版的《2023-2028年甲基化酶行業(yè)市場深度分析及發(fā)展策略研究報告》顯示

甲基化酶市場需求如何 未來甲基化酶行業(yè)市場還有前景嗎

甲基化酶，原核生物甲基化酶是作為限制與修飾系統(tǒng)中的一員，用于保護宿主DNA不被相應的限制酶所切割。在E.coli中，大多數(shù)都有三個位點特異性的DNA甲基化酶。甲基化酶行業(yè)研究報告主要分析了甲基化酶行業(yè)的市場規(guī)模、甲基化酶市場供需求狀況、甲基化酶市場競爭狀況和甲基化酶主要企業(yè)經(jīng)營情況、甲基化酶市場主要企業(yè)的市場占有率，同時對甲基化酶行業(yè)的未來發(fā)展做出科學的預測。

DNA甲基化：脊椎動物的DNA甲基化一般發(fā)生在CpG位點(胞嘧啶-磷酸-鳥嘌呤位點，即DNA序列中胞嘧啶后緊連鳥嘌呤的位點)。經(jīng)DNA甲基轉(zhuǎn)移酶催化胞嘧啶轉(zhuǎn)化為5-甲基胞嘧啶。人類基因中約80%-90%的CpG位點已被甲基化，但是在某些特定區(qū)域，如富含胞嘧啶和鳥嘌呤的CpG島則未被甲基化。這與包含所有廣泛表達基因在內(nèi)的56%的哺乳動物基因中的啟動子有關。1%-2%的人類基因組是CpG群，并且CpG甲基化與轉(zhuǎn)錄活性成反比。

Dam 甲基化酶可在 GATC 序列中的腺嘌呤 N6 位置上引入甲基。一些限制酶(PvuⅡ, BamHⅠ、BclⅠ、BglⅡ、XhoⅡ、MboⅠ、 Sau3AⅠ)的識別位點中含 GATC 序列，另一些酶 ClaⅠ(1/4)、 XbaⅠ(1/16)、TaqⅠ(1/16)、MboⅠ(1/16)、 HphⅠ(1/16) 的部分識別序列含此序列，如平均 4 個 ClaⅠ 位點(ATCGATN)中就有一個該序列。

有些限制酶對 Dam 甲基化的 DNA 敏感，不能切割相應的序列，如 BclⅠ、 ClaⅠ、 XbaⅠ 等。對甲基化不敏感的有 BamHⅠ、 Sau3AⅠ、 BglⅡ、 PvuⅠ 等。 MboⅠ 和 Sau3AⅠ 識別和切割位點相同，但其差異就在于前者對甲基化敏感。一般哺乳動物 DNA 不會在腺嘌呤 N6 上甲基化，因此對甲基化敏感的限制酶切割這些 DNA 不會受到影響。當需要在這些敏感位點上完全切割 DNA 時，可利用 dam- E.coli 擴增并提取 DNA

目的調(diào)查國內(nèi)6個省市25家醫(yī)院臨床分離鮑曼不動桿菌中介導高水平氨基糖苷類抗生素耐藥的16SrRNA甲基化酶基因armA、rmtA、rmtB的分布情況。方法收集國內(nèi)6省市8家省級醫(yī)院、浙江省11個地區(qū)17家市級醫(yī)院臨床分離的700株鮑曼不動桿菌。瓊脂稀釋法測定其對妥布霉素、阿米卡星、慶大霉素、異帕米星、奈替米星5種氨基糖苷類抗生素的最低抑菌濃度(MIC)值;PCR篩選三種甲基化酶基因armA、rmtA、rmtB，克隆測序明確基因型;脈沖場凝膠電泳(PFGE)分析菌株的同源性;

質(zhì)粒抽提、接合試驗及Southern雜交確定armA基因定位。結(jié)果對阿米卡星、慶大霉素、異帕米星、奈替米星的耐藥率分別為67.7%、70.9%、75.7%、63.5%和71.5%。對5種氨基糖苷類抗生素全部耐藥的菌株有377株，其中334株檢出armA基因;未發(fā)現(xiàn)rmtA、rmtB陽性菌株。

armA基因陽性菌株PFGE分型以A、B、C為主。堿裂解法反復抽提未得到質(zhì)粒，多次接合試驗未成功;Southern雜交顯示，armA基因分別位于克隆A、B、c菌株染色體ApaⅠ酶切PFGE約220、300、220kb大小的PFGE片段上。結(jié)論16SrRNA甲基化酶基因armA在鮑曼不動桿菌中廣泛存在，armA基因位于鮑曼不動桿菌的染色體上。

基因測序應用范圍廣，中游測序服務企業(yè)在技術集成上將有先發(fā)優(yōu)勢?；驕y序可應用于腫瘤檢測、遺傳病檢測等多方面。據(jù)測算，未來基因檢測在腫瘤應用領域市場規(guī)模將達到120億美元，占比60%;婚前、孕前、產(chǎn)前及新生兒基因檢測的市場規(guī)?？蛇_20億美元，占比為10%。

在整個基因測序產(chǎn)業(yè)鏈中，DNA樣本制備儀處于中游的測序服務提供商將憑借其獨有的技術獲取先發(fā)優(yōu)勢?，F(xiàn)階段，測序服務企業(yè)主要有Illumina、Roche、Pacific、Lifetech、華大基因、達安基因及貝瑞和康等公司，國內(nèi)的醫(yī)院、研究機構、藥企等基因測序服務市場基本被有技術和成本優(yōu)勢的華大基因、貝瑞和康和安諾優(yōu)達所占據(jù)。

從行業(yè)專利技術情況來看，隨著近年來我國基因檢測行業(yè)的不斷發(fā)展，研究的持續(xù)深入，行業(yè)相關專利數(shù)量也隨之不斷增長。數(shù)據(jù)顯示，2021年我國基因檢測相關專利數(shù)量為924件，同比下降1.3%。

根據(jù)數(shù)據(jù)顯示，受疫情影響，我國基因檢測行業(yè)市場規(guī)模增速放緩，達151億元，同比增長1.3%。預計到2023年行業(yè)規(guī)模將達300億元。2020年受疫情影響，我國消費級基因檢測市場規(guī)模有所下滑，為68.5百萬美元，同比下降13.9%。隨著疫情被有效控制，在需求的推動下，預計2023年行業(yè)規(guī)模將達158.3百萬美元。

(1) 甲基化特異性的PCR(Methylation-specific PCR，MSP)

用亞硫酸氫鹽處理基因組DNA，所有未發(fā)生甲基化的胞嘧啶被轉(zhuǎn)化為尿嘧啶，而甲基化的胞嘧啶不變;隨后設計針對甲基化和非甲基化序列的引物進行PCR。通過電泳檢測MSP擴增產(chǎn)物，如果用針對處理后甲基化DNA鏈的引物能得到擴增片段，則說明該位點存在甲基化;反之，說明被檢測的位點不存在甲基化。

(2)亞硫酸氫鹽測序法(Bisulfite sequencing PCR，BSP)

用亞硫酸氫鹽處理基因組DNA，則未發(fā)生甲基化的胞嘧啶被轉(zhuǎn)化為尿嘧啶，而甲基化的胞嘧啶不變。隨后設計BSP引物進行PCR，在擴增過程中尿嘧啶全部轉(zhuǎn)化為胸腺嘧啶，最后對PCR產(chǎn)物進行測序就可以判斷CpG位點是否發(fā)生甲基化稱為BSP-直接測序方法。將PCR產(chǎn)物克隆至載體后進行測序，可以提高測序成功率，這種方法稱為BSP-克隆測序法。

(3) 高分辨率熔解曲線法(High Resolution Melting，HRM)

在非CpG島位置設計一對針對亞硫酸氫鹽修飾后的DNA雙鏈的引物，這對引物中間的片段包含感興趣的CpG島。若這些CpG島發(fā)生了甲基化，用亞硫酸氫鹽處理后，未甲基化的胞嘧啶經(jīng)PCR擴增后轉(zhuǎn)變成胸腺嘧啶，而甲基化的胞嘧啶不變，樣品中的GC含量發(fā)生改變，從而導致熔解溫度的變化。

中研研究院對甲基化酶市場研究結(jié)論及發(fā)展建議

第一節(jié) 甲基化酶行業(yè)研究結(jié)論及建議

第二節(jié) 中研普華甲基化酶行業(yè)發(fā)展建議

一、甲基化酶行業(yè)發(fā)展策略建議

二、甲基化酶行業(yè)投資方向建議

三、甲基化酶行業(yè)投資方式建議

甲基化酶行業(yè)報告由中研普華行業(yè)分析專家領銜撰寫，主要分析了行業(yè)的市場規(guī)模、發(fā)展現(xiàn)狀與投資前景，同時對甲基化酶行業(yè)的未來發(fā)展做出科學的趨勢預測和專業(yè)的行業(yè)數(shù)據(jù)分析，幫助客戶評估甲基化酶行業(yè)投資價值。

甲基化酶行業(yè)報告對我國內(nèi)行業(yè)的供需狀況、發(fā)展現(xiàn)狀、子行業(yè)發(fā)展變化等進行了分析，重點分析了國內(nèi)甲基化酶行業(yè)的發(fā)展現(xiàn)狀、如何面對行業(yè)的發(fā)展挑戰(zhàn)、行業(yè)的發(fā)展建議、行業(yè)競爭力，以及甲基化酶行業(yè)的投資分析和趨勢預測等等。報告還綜合了行業(yè)的整體發(fā)展動態(tài)，對行業(yè)在產(chǎn)品方面提供了參考建議和具體解決辦法。

未來甲基化酶行業(yè)現(xiàn)狀如何?想了解更多相關內(nèi)容，請關注或查看中研研究院出版的報告：《2023-2028年甲基化酶行業(yè)市場深度分析及發(fā)展策略研究報告》。

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